Test ELISA: Hepatitis C

Ensayo inmunoenzimático (ELISA) para la detección de anticuerpos contra el virus de la hepatitis C

SIGNIFICACION CLINICA

La hepatitis C es la forma más común de hepatitis post- transfusional. Su agente etiológico es el virus C (HCV) y su transmisión se produce fundamentalmente por vía pa- renteral. Otras vías de transmisión, como la materno-fetal y la sexual, son poco eficientes. El 80% de las personas infectadas con HCV desarrollan infección crónica, y en un 30% la enfermedad progresa hasta la cirrosis o cáncer de hígado. La mayoría de las personas con hepatitis C no pre- senta síntomas, y por lo tanto, esta enfermedad raramente es diagnosticada antes de la aparición de sus complicaciones crónicas.

El genoma del HCV está constituido por una cadena simple positiva de ARN que codifica para una poliproteína, que puede dar origen a por lo menos 9 proteínas funcionales. Los primeros ensayos para hepatitis C fueron de primera generación y empleaban sólo la proteína NS4. Sin embargo, carecían de sensibilidad y especificidad. Actualmente existen ensayos de tercera generación que incorporan proteínas del core (estructural) y de las regiones no estructurales (NS3, NS4 y NS5).

Los ensayos serológicos para el diagnóstico de la infección por HCV detectan anticuerpos anti-HCV. Se emplean en el diagnóstico de la infección y en el control de unidades de donantes en bancos de sangre.

FUNDAMENTOS DEL METODO

Los pocillos de la policubeta están recubiertos con antígenos recombinantes derivados de la región estructural (core) y de la no estructural (NS3, NS4 y NS5) del virus de la hepatitis C. La muestra diluida se incuba en los pocillos. Si los anti- cuerpos contra el virus están presentes en la muestra, éstos se unen a los antígenos del pocillo. El material no unido es removido por lavado. En el paso siguiente se agrega el conjugado, que consiste en un anticuerpo monoclonal anti- IgG humana conjugado con peroxidasa. Este se une a los complejos antígeno-anticuerpo, formados previamente. El conjugado no unido se remueve por lavado. Posteriormente, se agrega una solución conteniendo tetrametilbencidina y peróxido de hidrógeno. Las muestras reactivas desarrollan color celeste que vira al amarillo cuando se detiene la reac- ción con ácido sulfúrico.

 

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