Test ELISA: HIV Ag/Ac

Ensayo inmunoenzimático (ELISA) para la detección simultánea del antígeno p24 de HIV-1 y de anticuerpos anti HIV-1 y anti HIV-2

SIGNIFICACION CLINICA

Los virus de la inmunodeficiencia humana (HIV-1 y HIV-2) son los agentes causales del Síndrome de la Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). Estos retrovirus son transmitidos por la ex- posición a ciertos fluidos corporales infectados, principalmente secreciones genitales y sangre o productos contaminados derivados de la sangre y por pasaje a través de la placenta. La evidencia serológica de la infección por HIV-1 y HIV-2 pue- de ser obtenida determinando la presencia de antígenos y anticuerpos en el suero de individuos en los que se sospecha que tienen la infección. Los antígenos pueden generalmente ser detectados en la fase aguda y durante la fase sintomática de la enfermedad. Los anticuerpos pueden ser detectados a lo largo de toda la infección, comenzando en la fase aguda o inmediatamente después de ella. Por ello es de fundamental importancia la utilización de una determinación de alta sensi- bilidad que pueda detectar antígenos y anticuerpos.

El ensayo de HIV Ag/Ac ELISA 4a Generación está diseñado para detectar antígeno p24 así como anticuerpos contra HIV-1, HIV-1 grupo O y HIV-2.

FUNDAMENTOS DEL METODO

Los pocillos de la policubeta están recubiertos con proteínas recombinantes y péptidos sintéticos de HIV-1 (gp41) y HIV-2 (gp36) y anticuerpos monoclonales anti-p24(*). La muestra se incuba en los pocillos, si la misma contiene antígeno p24 y/o anticuerpos contra HIV-1 o HIV-2 se unirán a los antígenos y/ o anticuerpos del pocillo. El material no unido es removido por lavado. En el paso siguiente se agrega el Conjugado 1 que contiene anticuerpos y antígenos marcados con biotina que se unirán a los antígenos/anticuerpos si están presentes en la muestra. Luego se agrega el Conjugado 2 (peroxidasa conjugada a estreptavidina) que se unirá al Conjugado 1. El conjugado no unido se remueve por lavado.

A continuación se agrega una solución conteniendo tetrame- tilbencidina (TMB) y peróxido de hidrógeno. Las muestras reactivas desarrollan color azul que vira al amarillo cuando la reacción se detiene con ácido sulfúrico (Stopper).

 

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