Test ELISA recombinante v.4.0: Chagatest

Ensayo inmunoenzimático (ELISA) para la detección de anticuerpos anti-Trypanosoma cruzi

SIGNIFICACION CLINICA

La enfermedad de Chagas es una infección parasitaria pro- ducida por el Trypanosoma cruzi. El diagnóstico de labora- torio depende del estadio en el cual se encuentre la enfer- medad. Durante la fase aguda, se efectúa directamente mediante la comprobación de los parásitos en sangre o por métodos inmunológicos que detecten IgM. Durante la fase crónica, se pueden usar métodos inmunológicos como: hemaglutinación, inmunofluorescencia, ensayo in- munoenzimático o Western blot.

FUNDAMENTOS DEL METODO

Chagatest ELISA recombinante v. 4.0 es un ensayo inmu- noenzimático «in vitro» para la detección cualitativa de anti- cuerpos anti-T. cruzi en muestras de suero o plasma hu- mano.

La muestra se diluye en la policubeta, cuyos pocillos se encuentran sensibilizados con seis antígenos recombinan- tes (SAPA, 1, 2, 13, 30 y 36) específicos de los estadios epimastigote y tripomastigote del T. cruzi, correspondien- tes a zonas altamente conservadas entre distintas cepas. Si la muestra contiene anticuerpos específicos, éstos for- marán un complejo con los antígenos y permanecerán uni- dos a la fase sólida. La fracción no unida se elimina por lavado y luego se agrega el conjugado (anticuerpo mono- clonal anti-IgG humana conjugado con peroxidasa), el cual reacciona específicamente con los anticuerpos anti-T. cruzi inmunocapturados. El conjugado no unido se elimina por lavado. La presencia de peroxidasa unida al complejo se revela mediante el agregado del sustrato cromogénico, te- trametilbencidina. Las muestras reactivas desarrollan co- lor celeste. La reacción enzimática se detiene mediante el agregado de ácido sulfúrico, produciendo un viraje del co- lor celeste al amarillo. La densidad óptica se mide en for- ma bicromática a 450/620-650 nm o a 450 nm.

 

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