Desempeño analítico de un nuevo método inmunoturbidimétrico ligado a micropartículas: “CRP hs Turbitest AA”

Carina Tallano
carina.tallano@wiener-lab.com
Centro de Investigación y Biotecnología – Wiener Laboratorios SAIC, Rosario – Argentina


La Proteína C Reactiva (CRP) es uno de los marcadores más sensibles dentro del grupo de reactantes de fase aguda. Después de infarto de miocardio, stress, trauma, infección, inflamación, cirugías o proliferación neoplásica, el nivel de CRP puede aumentar dentro de las 24 a 48 horas del episodio, hasta 2000 veces con respecto a valores de referencias. Sin embargo, el incremento de CRP es inespecífico y no puede ser interpretado sin conocimiento de la historia clínica completa y de los valores previos del paciente.
La determinación de CRP es clínicamente útil en el screening de enfermedades orgánicas, para monitorear la actividad inflamatoria de enfermedades como la artritis reumatoidea, para la detección de infecciones recurrentes en lupus eritematoso sistémico, en leucemia o después de cirugía, para la detección de rechazo de transplantes y para el manejo de septicemias y meningitis neonatal.
Numerosos estudios revelan que incrementos en los niveles de CRP dentro del intervalo de referencia está asociado con eventos coronario futuros en hombres y mujeres sanos. Aquellos individuos con un nivel de CRP basal en el cuartil más alto tienen 2 a 4 veces más riesgo, comparado con individuos en el cuartil más bajo, de presentar en algún momento infarto de miocardio, stroke isquémico, enfermedad arterial periférica o muerte cardíaca súbita. Es por ello que para poder emplear la determinación de CRP como marcador de riesgo de enfermedades cardiovasculares en individuos aparentemente sanos, se requieren métodos sensibles para la determinación de CRP (CRP high sensitivity).

Metodología
En el pasado, muchos laboratorios emplearon reactivos semicuantitativos de aglutinación con látex para la evaluación de CRP; dichos reactivos resultaron poco reproducibles, lentos y sujetos a la interpretación subjetiva de los resultados.
Un importante avance se dio a partir de 1970 con la aparición de métodos inmunoturbidimétricos: rápidos, reproducibles y capaces de ser empleados en la mayoría de los analizadores de química clínica.
Para incrementar la sensibilidad de los métodos inmunoturbidimétricos se acoplaron anticuerpos anti-CRP a micropartículas. Cuando estos anti-CRP reconocían a la proteína CRP, formaban inmunocomplejos grandes que amplificaban notablemente la señal producida. Estos métodos eran adecuados en su utilización como CRP high sensitivity, pero carecían de un rango de medición amplio y apropiado para cubrir concentraciones elevadas presentes en estados inflamatorios y/o infecciosos.
Así, en los últimos años el empleo de micropartículas de diferentes tamaños permitió desarrollar reactivos de segunda generación para la determinación de CRP con un amplio rango dinámico, siendo capaz de cumplir con ambas funciones:
– detectar muestras patológicas de elevada concentración sin necesidad de post-dilución: marcador de estados inflamatorios y/o infecciosos;
– lograr una excelente sensibilidad dentro del rango de referencia poblacional, para ser usado como marcador de riesgo de eventos cardiovasculares.

Objetivo
Evaluar el desempeño analítico de un nuevo método inmunoturbidimétrico de segunda generación “CRP hs Turbitest AA” en diferentes sistemas analíticos Wiener lab., frente a los requerimientos internacionales de calidad para CRP (Optimal Biological Variation (BV) – updated 2014).

Materiales y Métodos
La evaluación del desempeño analítico de CRP hs Turbitest AA comprendió el estudio de distintos aspectos de la performance del producto como: Límites de Sensibilidad (límites de detección y cuantificación), Rango de Seguridad, Rango de Medición, Imprecisión y Comparación de métodos en diferentes sistemas analíticos Wiener lab. (CT Series, CMD Series, CB Series, CM Series). En las calibraciones de estos sistemas se utilizó un PCR calibrador en serie Turbitest AA (master lot) trazado al material de referencia internacional IFCC/BCR CRM 470.
Como métodos comparativos se utilizaron PCR ultrasensible Turbitest AA/CT Series.

Desempeño analítico
Límites de sensibilidad
Dicha evaluación comprendió la determinación de LoB (Límite de Blanco), LoD (Límite de Detección) y LoQ (Límite de Cuantificación) a través del protocolo EP17A del CLSI.
El LoQ es la cantidad más baja del analito en una muestra que puede ser determinada cuantitativamente con precisión y exactitud aceptable bajo condiciones experimentales (Bias < 21.8%, CV < 21.1%, Imprecisión y Bias deseables BV).

Criterios de aceptación:
LoD y LoQ < 0.5 mg/L de CRP.

Resultados (Figura 1)

Rango de Seguridad – Efecto Prozona
Para determinar el Rango de Seguridad, se ensayaron muestras con exceso de antígeno, es decir, concentraciones superiores al último punto de la curva de calibración.

Criterios de aceptación
Los resultados de las muestras con exceso de antígeno deben ser mayores al límite superior del rango de medición.

Resultados (Figura 2 y 3)

Rango de medición
El Rango de Medición se define como la zona lineal del rango de calibración, establecida a través del protocolo EP6A del CLSI que es delimitada en el extremo inferior por el límite de cuantificación (LoQ) y en el extremo superior por el límite inferior del Rango de Seguridad.

Criterios de aceptación
Desvío de linealidad máximo < 10.9% – Bias óptimo BV.

Resultados (Figura 4)

Imprecisión
La evaluación de la imprecisión del producto CRP hs Turbitest AA fue realizada de acuerdo al protocolo EP 15 A3 del CLSI.
Se evaluaron controles y muestras con distinto nivel de CRP con el fin de cubrir los niveles de importancia clínico. Cada muestra fue ensayada por quintuplicado en 1 corrida diaria durante 5 días.

Criterios de aceptación (Figura 5, 6, 7 y 8)
Los CVwr y CVT deben ser menores a 10.6% – Imprecisión óptima BV.
CVwr: Coeficiente de variación intracorrida.
CV T: Coeficiente de variación total.

Comparación de métodos
La comparación de métodos fue realizada de acuerdo al protocolo EP9-A2 del CLSI. Se analizaron muestras de pacientes (sueros y plasmas heparinizados) en un rango de 0.1 a 100 mg/L de CRP durante varios días, empleando el reactivo CRP hs y PCR ultrasensible CT Series Y-X Plot. En cada analizador se estimaron los parámetros de regresión por Passing Bablok y se determinaron los Bias relativos en los niveles de decisión médica.

Criterios de aceptación
Bias o Sesgo en los niveles de decisión médica < 10.9% – Bias óptimo BV.

Resultados (Figura 9 y 10)
CRP hs vs PCR ultrasensible Turbitest AA

Conclusiones
El reactivo CRP hs Turbitest AA cumple con los criterios de calidad establecidos en todos los sistemas analíticos Wiener lab. y no evidencia diferencias clínicamente significativas frente a los métodos comparativos evaluados.
La amplitud de los rangos de medición y seguridad encontrados, como la elevada sensibilidad en el intervalo de referencia poblacional, permiten considerar a CRP hs Turbitest AA como un excelente reactivo de segunda generación que puede cubrir su utilidad como marcador de estados inflamatorios e infecciosos agudos como así también, indicador de riesgo de eventos cardiovasculares futuros en la población sana.

Bibliografía
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– Dati, F. – Clin. Chem. Lab. Med. 39/11:1134 (2001).
– WHO Publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev. 2 (2002).
– EP 15A3 – Clinical and Laboratory Standards Institute-CLSI.
– EP 6 A – Clinical and Laboratory Standards Institute-CLSI.
– EP 9 A2 – Clinical and Laboratory Standards Institute-CLSI.
– EP 17 A – Clinical and Laboratory Standards Institute-CLSI.


Imagen: Adaptado de http://www.wiener-lab.com.ar

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