Calibración de tromboplastinas

Bqca. María Gabriela Alegre
malegre@wiener-lab.com.ar
Product Team – Wiener Laboratorios SAIC, Rosario – Argentina


El Tiempo de Trombina (TP) está entre los ensayos de pesquisaje más solicitados en los laboratorios clínicos. El reactivo está compuesto por Tromboplastina (Factor Tisular + Fosfolípidos) + Calcio. La tromboplastina puede ser de extracto de cerebro de conejo, de placenta humana o FT recombinante con fosfolípidos purificados.
El TP es solicitado para cualquiera de los propósitos siguientes:
• Chequeos preoperatorios.
• Evaluación de la actividad de los factores de la coagulación.
• Detección de inhibidores adquiridos.
• Control de la anticoagulación oral (ACO).
Los anticoagulantes orales inhiben a los inductores de la oxido reducción de la vitamina K, lo cual lleva aparejado la disminución de la actividad de todos aquellos factores dependientes de la vitamina K (Factor II, VII, X, IX, Proteína C, Proteína S y Proteína Z).
Debido a la sensibilidad de la prueba de TP al déficit de los factores II, V, VII y X, es que resulta la prueba de elección para evaluar la terapéutica con anticoagulantes orales.
A través de la calibración se alcanza la trazabilidad a los patrones de referencia adecuados. Las pruebas de la coagulación se distinguen de las determinaciones bioquímicas en que en ellas se mide el tiempo de reacción en un sistema complejo, muy alejado de las condiciones fisiológicas, y muy influenciadas por las propiedades de los diferentes reactivos disponibles en el mercado. Por lo que, una correcta calibración de los reactivos es indispensable para asegurar resultados reproducibles y comparables entre distintos laboratorios y poder acceder a conductas terapéuticas similares en las diferentes instituciones de salud.
Para esto se diseñó un sistema de calibración a través de un gráfico logarítmico de los TP 1,2,3, a partir del cual se establece un parámetro llamado ISI (Índice de Sensibilidad Internacional) que permite cuantificar la sensibilidad de las tromboplastinas y estandarizar la expresión de los resultados de TP en una escala común llamada RIN (Razón Internacional Normatizada).
El RIN es una conversión matemática del TP, calculado como sigue:
RIN = (TP paciente ÷ MNTP)ISI
El sistema de estandarización del TP se basa en la calibración de una tromboplastina particular en relación con una preparación internacional de tromboplastina de referencia (IRP) de la Organización Mundial de la Salud (OMS) a la que se le asignó por definición el ISI de 1,00.
Según este procedimiento los logaritmos de los TP realizados con diferentes tromboplastinas se relacionan linealmente y esta relación lineal es estimada a través del cálculo de la regresión ortogonal de los datos. En ella, el ISI es igual a la pendiente de la recta de regresión ortogonal obtenida cuando los log de los TP de “X” cantidad de plasmas, expresada en segundos y procesados con una IRP, son graficados en función de los log de los TP de los mismos plasmas procesados con la tromboplastina a calibrar.
Elevando la razón TP paciente/TPNM al valor de ISI, se hallará la razón teórica que se hubiera obtenido de realizar la determinación del TP con la preparación de referencia, a ese valor se le denomina Razón Internacional Normalizada (RIN), el cual constituye la forma correcta de expresión de los resultados del TP cuando se trata de control de tratamiento con ACO.

Existen 4 tipos de procedimientos de calibración
1. Calibración de las preparaciones internacionales de referencia.
2. Calibración de estándares secundarios
3. Calibración por el fabricante de las preparaciones comerciales con los estándares de trabajo correspondientes.
4. Calibración del sistema local.

Cuando se utiliza un reactivo de TP con un ISI específico al instrumento, la verificación local de ISI se puede realizar para garantizar el valor ISI para el laboratorio en particular. Si es diferente, la calibración local debería ser realizada.
Cuando se utiliza un ISI genérico, la verificación del ISI sería obligatoria y la calibración local del ISI es muy recomendable.
El propósito es mejorar la imprecisión interlaboratorio de la determinación del RIN.

Verificación del ISI
El procedimiento de verificación debería usar plasmas (liofilizados o congelados frescos) que han sido certificados por el método de manual y un reactivo trazable al IRP.

Condiciones
• Se debe utilizar un mínimo de tres plasmas certificados, con una amplia gama de RIN entre 1,5 y 4,5.
• Los RIN de los plasmas certificados deben ser determinados usando la tromboplastina rutina del laboratorio con el ISI asignado por el fabricante y el instrumento de rutina.
• Al realizar la verificación, los plasmas certificados deben procesarse por duplicado durante al menos un período de dos días.
• La diferencia inter-corrida (dentro del día) entre duplicados, así como la diferencia entre la media de los duplicados intra-corrida (entre los días) no deben superar el 10%.
• De acuerdo con el documento ISTH1, el RIN obtenido debe compararse con el valor “verdadero” ± 15%. En concreto, para cada plasma certificado, el RIN obtenido debe compararse con el valor real (valor asignado a los plasmas certificados) en ± 15%.
• Si los resultados son mayores que el 15% del valor “verdadero”, la acción correctiva es necesaria.

Frecuencia de realización
La verificación debería realizarse con cualquier cambio de lote de reactivo o de instrumento, o después de una reparación importante del instrumento. Todas estas situaciones pueden afectar el valor del TP, ISI, y TPMN. Como mínimo, si no se producen cambios importantes, la verificación debería realizarse por lo menos una vez al año.
Un punto crítico a tener en cuenta debe ser el cálculo del TPMN (Media Normal para el TP) y determinar a partir de éste un rango de valores para los TP de pacientes Normales. Cada Laboratorio debe establecer su rango de referencia determinando el TP de al menos 20 individuos sanos que incluyan mujeres y hombres con edad entres 20-65 años. Se calcula la media geométrica y el DS, y se eliminan los valores que superen ± 3DS; se repite el cálculo de la media geométrica y el DS, y se consideran entonces como valores de referencia los resultados entre media ± 2 DS.
Laboratorio Práctico
Estandarización del Tiempo de Trombina

1 ICTH/ISTH. Protrombina time standarization: Report of the expert panel on oral anticoagulant control. Thromb Haemost 1979; 42:1073-114.
2 WHO Expert Committe on biological Standarization, 33rd Report. WHO Technical Report Series. 1983; 687: 81-105.
3 (Clinical and Laboratory Standards Institute. Procedures for Validation of INR and Local Calibration of PT/INR Systems; Approved Guideline. CLSI document H54-A [ISBN 1-56238-580-1]. Clinical and Laboratory Standards Institute, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2005.)


Imagen adaptada de: http://f1.panorama.com.ve

Deja tu comentario