Evaluación de desempeño de pruebas de detección de anticoagulante lúpico en el programa externo de calidad ECAT

Evaluación de desempeño de pruebas de detección de anticoagulante lúpico en el programa externo de calidad ECAT
Bioq. Laura González
Laura.gonzalez@Wiener-Lab.com
Centro De Investigación Y Biotecnología – Wiener Laboratorios Saic, Rosario – Argentina

 


La participación en un Programa Externo de Calidad (EQA) provee al laboratorio una visión acerca de su desempeño para un determinado test en relación a otros laboratorios que utilizan sus mismos reactivos e instrumentos o incluso diferentes.
En el presente reporte se presentan los resultados de nuestra participación durante los años 2019 y 2020 en el Programa Externo de Calidad organizado por la ECAT (External quality Control of diagnostic Asays and Tests Foundation) para confirmar la presencia de Anticoagulante Lúpico (LA) empleando los reactivos LA Screen y LA Confirm de Wiener lab.
A lo largo de los años diferentes grupos de expertos han publicado guías con recomendaciones para la detección de LA en el laboratorio. Si bien existen algunas diferencias entre ellas, todas coinciden en que los tres hallazgos principales para acreditar la presencia de LA son: prolongación de un tiempo de coagulación dependiente de fosfolípidos, demostración de un efecto inhibidor a través de un test de mezcla y demostración de que ese inhibidor es dependiente de fosfolípidos. Para cumplir con estos requisitos cada laboratorio debe emplear dos test de screening basados en principios distintos, los test de mezcla respectivos que permitan corroborar la presencia de un inhibidor y un único ensayo confirmatorio. En general se recomienda una prueba de APTT sensible a LA y el test dRVVT, veneno de víbora de Russell diluido como test de screening; el ensayo confirmatorio debe emplear el mismo principio de los test de screening.
El programa externo del ECAT está acreditado desde 2012 de acuerdo al standard ISO/IEC 17043:2010 por el Dutch Council for Accreditation y está focalizado únicamente en pruebas de trombosis y hemostasia agrupadas en 33 módulos, siendo uno de ellos el “Lupus Anticoagulant/Phopholipid Antibodies” con un número aproximado de 600 participantes. Cada laboratorio registrado en el programa recibe 4 envíos anuales de una única muestra incógnita. Las muestras son plasmas humanos liofilizados para poder garantizar su estabilidad durante el proceso de distribución.
De la misma manera en que lo hacen los distintos laboratorios, Wiener lab. evalúa el desempeño de los productos que comercializa a través de su participación en diferentes programas externos de calidad.
Una vez recibida la muestra correspondiente a cada ronda, la misma se reconstituye siguiendo las indicaciones del programa para luego ser procesada en el coagulometro COR 50. Cumpliendo con el protocolo establecido para la pesquisa de LA, se emplean dos métodos de screening: APTT Ellagic y LA Screen y un método confirmatorio: LA Confirm. También se realiza un test de mezcla, para lo cual la muestra es mezclada en partes iguales con un pool de plasmas normales que luego es procesado con los dos métodos de screening. Finalmente se calcula el Ratio o Razón normalizada LAs/ LAc, como indicador final de la presencia o ausencia de LA. Todos los resultados son reportados “on line” y se expresan como “ratios” o “razones normalizadas”.
Para estimar el desempeño, el programa ECAT emplea un indicador denominado “Z score”. Este representa la distancia entre el resultado del laboratorio participante y el valor de consenso del grupo par, expresado en unidades de desvío estándar. Este indicador es calculado para grupos de consenso a distintos niveles; yendo de lo particular a lo más general: marca de reactivo + instrumento hasta método. Para que el grupo sea considerado en el análisis estadístico debe cumplir con tener al menos 10 participantes. De acuerdo a la ISO 17043 / ISO 15328, los criterios de aceptabilidad del z score son los siguientes:
-2 < z score < 2 resultado aceptable.
-3 < z score < 3 resultado cuestionable cuya causa debe investigarse.
Z score < -3 y > 3 resultado inaceptable.
En la Tabla 1 se muestran los resultados obtenidos con los reactivos LA Screen y LA Confirm de Wiener lab. para las pruebas de screening, mezcla y confirmatoria correspondientes a las rondas del ECAT de los años 2019 y 2020. Como grupo par se eligió el grupo que engloba todas las marcas comerciales que emplean el método dRVVT con más de 500 participantes.

Si bien como se dijo anteriormente se debe realizar el screening con 2 métodos, el objetivo del presente reporte es evaluar el desempeño de los reactivos basados en el principio dRVVT, por lo cual y para no complicar el análisis, solo se muestran los resultados obtenidos con dichos reactivos. La ventaja de realizar la comparación a través de la razón en lugar de los tiempos de coagulación es que se independiza de las diferencias debidas a las distintas sensibilidades entre reactivos comerciales.
De la tabla se concluye que los resultados obtenidos con reactivos LA Screen y LA Confirm, son muy comparables con la media del grupo de consenso. Esto se desprende no solo de la simple comparación de las razones para los tres tipos de prueba: screening, mezcla y confirmatoria, sino a través de los valores de Z score, que en todos los casos han caído dentro del rango considerado aceptable (-2 < Z score < 2).
Debe aclararse que no todos los participantes informan la totalidad de las pruebas e incluso algunos solo reportan la conclusión final determinada por la razón LAs/LAc. Esto sumado a que resultados con errores son excluidos del análisis estadístico, hacen que la comparación de los “N” no sea coincidente para todas las pruebas.
De la correcta interpretación de los resultados obtenidos para todas las pruebas finalmente, el laboratorio debe concluir la presencia o no de Anticoagulante Lúpico en la muestra. En la Tabla 2 se muestra la conclusión final a la que se llegó empleando los reactivos Wiener lab. y la respuesta de la totalidad de los participantes del programa independientemente del método utilizado. Como puede observarse, la conclusión obtenida con reactivos Wiener lab. coincide con más del 80% de los laboratorios participantes.

La muestra 20.151 merece algún análisis adicional ya que a pesar de ser una muestra negativa para LA, posee un porcentaje de resultados “NEGATIVO” relativamente bajo (77%). Para esta muestra hubo 32 laboratorios (6.9%) que informaron la muestra como “BORDERLINE” y 64 laboratorios que la informaron como “POSITIVA”. Esta muestra, según consta en el reporte de ECAT es una muestra con un nivel elevado de PCR. Es sabido que entre los interferentes para la detección de LA, figuran los reactantes de fase aguda, los cuales pueden provocar falsos positivos con algún tipo de reactivos.
Las muestras 19.37, 19.69 y 19.154 tuvieron un porcentaje significativo de resultados “BORDERLINE” (10.6%, 9.7% y 9.7%) que generaron una disminución de la tasa de positivos. Esto se explica porque son muestras con presencia de LA débilmente positivo lo cual en ocasiones y debido a la falta de sensibilidad de algunas pruebas puede dar resultados dudosos. En estos casos se aconseja que la prueba sea reevaluada en un plazo no mayor a 12 semanas.
La contribución del laboratorio en patologías como el Síndrome Antifosfolipídico es de crucial importancia y por eso la selección de los sistemas analíticos a emplear, debe garantizar una detección precisa que asegure el correcto diagnóstico y tratamiento de la enfermedad.
En este sentido se destaca también la importancia de que los laboratorios participen en Programas Externos de Calidad ya que les permitirá evaluar su desempeño respecto al resto de los laboratorios y monitorear que el mismo se mantenga estable en el tiempo.