Test ELISA: Chagatest

Ensayo inmunoenzimático (ELISA) para la detección de anticuerpos anti-Trypanosoma cruzi

SIGNIFICACION CLINICA

La enfermedad de Chagas es una infección parasitaria pro- ducida por el Trypanosoma cruzi. El diagnóstico de labora- torio depende del estadio en el cual se encuentre la enfer- medad. Durante la fase aguda, se efectúa directamente mediante la comprobación de los parásitos en sangre o por métodos inmunológicos que detecten IgM. Durante la fase crónica, se pueden usar métodos inmunológicos como: hemaglutinación, inmunofluorescencia, ensayo in- munoenzimático o Western blot.

FUNDAMENTOS DEL METODO

Chagatest ELISA lisado es un ensayo inmunoenzimático «in vitro» para la detección cualitativa de anticuerpos anti-T. cruzi en muestras de suero o plasma humano.
La muestra se diluye en la policubeta, cuyos pocillos se encuentran sensibilizados con antígenos de T. cruzi, co- rrespondientes a zonas altamente conservadas entre dis- tintas cepas. Si la muestra contiene anticuerpos específi- cos, éstos formarán un complejo con los antígenos y per- manecerán unidos a la fase sólida. La fracción no unida se elimina por lavado y luego se agrega el conjugado (anti- cuerpo monoclonal anti-IgG humana conjugado con peroxi- dasa), el cual reacciona específicamente con los anticuer- pos anti-T. cruzi inmunocapturados. El conjugado no unido se elimina por lavado. La presencia de peroxidasa unida al complejo se revela mediante el agregado del sustrato cromogénico, tetrametilbencidina. Las muestras reactivas desarrollan color celeste. La reacción enzimática se detie- ne mediante el agregado de ácido sulfúrico, produciendo un viraje del color celeste al amarillo. La densidad óptica se mide en forma bicromática a 450/620-650 nm o a 450 nm.

 

Continúe leyendo el procedimiento completo

 

 

Deja tu comentario